細(xì)胞鐵離子檢測(cè)試劑盒操作方法

描述：鐵是人體必需的元素之一，對(duì)人體的新陳代謝和身體健康具有重要作用，血液中鐵的含量不足，就會(huì)造成缺鐵性貧血。鐵存在于人體所有的細(xì)胞內(nèi)，各組織、器官包括各內(nèi)分泌腺都含有鐵。肝臟、脾臟和肺組織內(nèi)含量較為豐富。成人體內(nèi)含鐵3～5克，大部分都以蛋白質(zhì)復(fù)合物形式存在，極少部分以離子的形態(tài)存在。本試劑盒采用亞鐵嗪比色法可以定量細(xì)胞鐵離子，線性范圍5~300uM。產(chǎn)品包括標(biāo)準(zhǔn)品和空白對(duì)照，本試劑盒可進(jìn)行100個(gè)樣品的檢測(cè)。

規(guī)格：100T

儲(chǔ)存：4℃保存  6個(gè)月有效

操作步驟：

1. 樣品準(zhǔn)備（以24孔板為例）：

將含鐵元素DMEM培養(yǎng)過(guò)的細(xì)胞用冷的PBS 2ml洗兩遍，將PBS吸棄（若不馬上檢測(cè)可將其凍存于-20℃）。200ul/孔裂解液裂解細(xì)胞，置于搖床裂解2h。

2. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：用試劑盒提供的稀釋用液將3mM 的標(biāo)準(zhǔn)品母液稀釋為：300 uM、150uM、75uM、37.5uM、18.75uM、9.38uM、4.69uM。注意倍比稀釋并設(shè)置0濃度對(duì)照反應(yīng)管。

3. 將緩沖液與4.5%高錳酸鉀溶液按1:1混勻，稱為混液A。 

5. 混勻，60℃ 孵育1h。

6. 冷卻至室溫，將管蓋與管壁上的液滴離心入管底。

7. 加入30ul 鐵離子檢測(cè)劑，混勻，室溫孵育，30min。

8. 取200ul 于96孔板，在550nm測(cè)定吸光度。如果不能測(cè)定550nm，也可以在540nm~580nm范圍內(nèi)檢測(cè)。

9. 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線并計(jì)算鐵離子濃度。

說(shuō)明：

1. 本試劑盒不受錳離子、鎂離子、鎳離子和鋅離子等的干擾。
2. 操作過(guò)程中，樣品與試劑等避免與鐵器接觸，以防污染。

3. 所測(cè)樣本的值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，應(yīng)稀釋樣品后重新測(cè)定。

4. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作，檢測(cè)試劑有腐蝕性，請(qǐng)小心操作，若不慎沾到皮膚上請(qǐng)馬上用清水沖洗干凈。

5. 該試劑盒僅供科學(xué)研究使用。