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Western-blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)在上樣這一步的諸多注意事項(xiàng)

更新時(shí)間:2017-05-24      瀏覽次數(shù):1531

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Western-blot實(shí)驗(yàn)代測(cè)在上樣這一步的諸多注意事項(xiàng)!

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老師自己實(shí)驗(yàn)可在我司購(gòu)買WB試劑盒,提供除抗體和膜之外的其他試劑,歡迎大家。

試劑盒組份如下:
試劑組分 包裝規(guī)格
10*電泳液 100ml*1
10*電轉(zhuǎn)液 100ml*1
10*TBST 100ml*1
2*上樣緩沖液 1ml*1
PVDF膜(0.45um或者0.22um) 2張
顯色A液 6ml*1
顯色B液 6ml*1
BSA 5g*1
脫脂奶粉 5g*1
預(yù)染marker 20ul*1
二抗(抗鼠/抗兔/抗羊 可選) 50ul*1

 

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1 SDS-PAGE凝膠配置

樣本處理

在收集的蛋白樣品中加入適量濃縮的SDS-PAGE蛋白上樣緩沖液。100℃或沸水浴加熱3-5分鐘,以充分變性蛋白。

上樣與電泳

冷卻到室溫后,把蛋白樣品直接上樣到SDS-PAGE膠加樣孔內(nèi)即可。為了便于觀察電泳效果和轉(zhuǎn)膜效果,以及判斷蛋白分子量大小。

通常電泳時(shí)溴酚藍(lán)到達(dá)膠的底端處附近即可停止電泳,或者可以根據(jù)預(yù)染蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)的電泳情況,預(yù)計(jì)目的蛋白已經(jīng)被適當(dāng)分離后即可停止電泳。

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