藥物治療的前提是它們與細(xì)胞靶點(diǎn)的物理結(jié)合。這種結(jié)合的測定往往是在體外進(jìn)行，無法充分模擬細(xì)胞內(nèi)的復(fù)雜環(huán)境?？茖W(xué)家近日開發(fā)出一種新方法，可直接評估活細(xì)胞內(nèi)靶點(diǎn)作用的動態(tài)過程。

闡釋小分子調(diào)節(jié)劑如何與細(xì)胞內(nèi)的靶點(diǎn)結(jié)合，對了解藥理機(jī)制十分關(guān)鍵。除了靶點(diǎn)作用（target engagement）的特異性和親和力，非平衡條件的結(jié)合動力學(xué)也決定了候選藥物的治療潛力。這些參數(shù)通常是通過生化方法來評估的，但無法充分模擬細(xì)胞內(nèi)的復(fù)雜性。出于這個原因，制藥行業(yè)一直希望在完整細(xì)胞內(nèi)評估靶點(diǎn)作用。

科學(xué)家利用NanoLuc技術(shù)開發(fā)出一種新方法，可測定活細(xì)胞中的靶點(diǎn)停留（target residence），作為靶點(diǎn)作用的重要方面。這種技術(shù)利用生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移（BRET），允許實(shí)時測定活細(xì)胞內(nèi)藥物與蛋白靶點(diǎn)的結(jié)合。

為了檢測藥物-靶點(diǎn)的相互作用，NanoBRET技術(shù)采用細(xì)胞通透性的熒光示蹤劑，旨在與NanoLuc標(biāo)記的蛋白靶點(diǎn)相互作用。這種相互作用的結(jié)果是NanoLuc蛋白的能量轉(zhuǎn)移到示蹤劑上，產(chǎn)生一種可測量的信號。

如果小分子候選藥物與蛋白靶點(diǎn)相互作用，示蹤劑就需要和藥物競爭，這樣BRET信號減弱。藥物停留時間的測定依賴于化合物的預(yù)平衡、過量化合物的去除，以及示蹤劑的添加。實(shí)時信號監(jiān)測顯示，緩慢解離的化合物阻礙示蹤劑的結(jié)合，使得BRET信號緩慢產(chǎn)生。

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